大（?。┦笸庵苎行粤＜?xì)胞分離液 KIT 說明書   大（小）鼠外周血中性粒細(xì)胞分離液 KIT 說明書

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】

適用儀器：*大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)

【檢驗(yàn)方法】

全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

1取一支 15ml 離心管，先加入中性粒細(xì)胞分離液試劑 A：3ml，后加入 80%濃度試劑 A溶液（中性粒細(xì)胞分離液試劑 A：樣本稀釋   液=4：1 的混合液）：1.5ml，形成梯度界面。

2制備血液樣本：抗凝血液與紅細(xì)胞沉降液按 1：1 比例混勻后，小心加于分離液梯度界面之上，800g 離心 20min。

3離心后，血漿層下出現(xiàn)兩層白色環(huán)狀細(xì)胞層，取下層白色環(huán)狀中性粒細(xì)胞層（會(huì)有少量紅細(xì)胞混雜），加 3-5 倍體積清洗液混勻，400g 離心 10min。

4離心后棄上清，后可通過兩種方法去除紅細(xì)胞。

方法一：細(xì)胞沉淀用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞（具體方法參見“紅細(xì)胞裂解液說明書”）。

方法二：

1細(xì)胞沉淀用 1ml 紅細(xì)胞沉降液重懸，加于 3ml 中性粒細(xì)胞分離液試劑 A 之液面上，400g 離心 20min。

2取白色環(huán)狀細(xì)胞層，加 3-5 倍體積清洗液混勻，250g 離心 10min，重復(fù)洗滌 2-3 次，獲得目的細(xì)胞（如仍有少量紅細(xì)胞混雜，使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞）。

【注意事項(xiàng)】

1全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*佳的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，*好在取血 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，血液存放時(shí)間越長(zhǎng)，細(xì)胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

2本實(shí)驗(yàn)*好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

3分離液用量大于血液樣本時(shí)，分離效果更佳。

4請(qǐng)勿使用具有紅細(xì)胞保護(hù)成分的抗凝劑，否則影響分離效果（離心后，紅細(xì)胞不能完全沉至離心管底部）。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染**，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)中性粒細(xì)胞提取率大于 80%。

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1所獲得中性粒細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

2所獲得中性粒細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

3所獲得中性粒細(xì)胞的鑒定方法

A.流式細(xì)胞技術(shù)

B.**組化技術(shù)

C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

【可能存在的問題及解決方法】

1.由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

2本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對(duì)離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對(duì)離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

3本分離液依照國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級(jí)原料，性能指標(biāo)與國(guó)產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不完全的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對(duì)離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到*佳分離效果，離心力*小不得小于 400g，*大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

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