BCA蛋白定量試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)
l 準(zhǔn)確靈敏：BCA試劑的蛋白質(zhì)測(cè)定范圍是20-2000 μg/mL,加強(qiáng)法可檢測(cè)到5 μg/mL。
l 快速：45分鐘內(nèi)可完成測(cè)定。
l 可在微孔板中進(jìn)行。
l 干擾因素小。
l 不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于Bradford。
l 不受低濃度的EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨、脂類的干擾。
l 標(biāo)準(zhǔn)曲線接近直線，可以單點(diǎn)定標(biāo)。
產(chǎn)品組分
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組分
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規(guī)格
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Reagent A
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100 mL
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Reagent B
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2.5 mL
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Protein Standard (1mg/mL)
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5 x 1mL
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保存條件
蛋白標(biāo)準(zhǔn)貯藏在-20°C. 其它保存在4°C，有效期一年。
注意
·若發(fā)現(xiàn)試劑中有沉淀，可攪拌或在37°C 溫育使其溶解，如發(fā)現(xiàn)**污染則應(yīng)丟棄。
·高濃度的EDTA，EGTA，DTT，硫酸銨，脂類會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，改用Bradford法測(cè)定。
·Reagent A和B應(yīng)密封保存。
·Reagent A與Reagent B應(yīng)密封保存。
·試劑具有腐蝕性，如接觸皮膚眼睛等，請(qǐng)用大量水清洗，或就醫(yī)。
操作步驟
1. 配置BCA工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，將Reagent A和Reagent B按照50:1的比例配置，充分混勻。該工作液室溫下24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
名稱
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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Protein Standard(μL)
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0
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25
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50
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75
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100
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去離子水 (μL)
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100
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75
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50
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25
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0
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BCA工作液 (mL)
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2
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2
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2
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2
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2
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2
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樣品 (μL)
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100
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混勻，在37°C放置30分鐘，冷卻到室溫，測(cè)定A562的吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出蛋白濃度。
3.樣品和試劑的比可以按比例放大或縮小，微孔檢測(cè)時(shí)，可以按比例縮小，但總體積不小于100 μL。
附注：
以下是不干擾本方法測(cè)定的物質(zhì)濃度：
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成分
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相容濃度
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成分
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相容濃度
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NP-40
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5.0%
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葡萄糖
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10 mM
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Emulgen
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1.0%
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EDTA
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10 mM
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Hepes
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100 mM
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Sodium Chloride
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1.0 M
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DTT
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1 mM
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NaOH
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0.1 M
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Guanidine.HCl
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4.0 M
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Ammonium Sulfate
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1.5 M
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Triton X-100
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5.0%
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乙酸鈉 pH5.5
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200 mM
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辛基糖苷
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5.0%
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SDS
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5.0%
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Urea
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3.0 M
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Brij-35
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5.0%
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蔗糖
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40%
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Lubrol
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1.0%
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Glycine，pH 2.8
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100 mM
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CHAPS
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5.0%
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