Bradford 蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品簡介：
Bradford法（考馬斯亮藍(lán)法），是目前靈敏度*高的蛋白質(zhì)測定法之一。當(dāng)Bradford 染色液（考馬斯亮藍(lán)G250）和蛋白在酸性條件下結(jié)合時(shí)，溶液顏色由棕黑色轉(zhuǎn)為藍(lán)色，*大吸光值波長由456nm 轉(zhuǎn)至595nm，吸光值與蛋白質(zhì)的含量在一定濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系，通過測定吸光值大小并對照標(biāo)準(zhǔn)蛋白的吸光值，推算出蛋白濃度，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測定的快速，穩(wěn)定和高靈敏度。
Bradford染色液為2倍濃縮母液，便于儲存。
產(chǎn)品組成：
|
產(chǎn)品組成
|
301003
|
301004
|
|
規(guī)格
|
250 assays
|
1000 assays
|
|
蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)
|
0.5ml
|
2ml
|
|
Bradford 2x染色液
|
25ml
|
100ml
|
使用方法：
A． 96孔酶標(biāo)板測定：
1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。取一塊酶標(biāo)板，按以下表格數(shù)據(jù)加入試劑：
|
孔號
|
0
|
1
|
2
|
3
|
4
|
5
|
6
|
|
蛋白標(biāo)準(zhǔn)（ml）
|
0
|
1
|
2
|
4
|
6
|
8
|
10
|
|
去離子水（ml）
|
100
|
99
|
98
|
96
|
94
|
92
|
90
|
|
Bradford 2x染色液（ml）
|
100
|
100
|
100
|
100
|
100
|
100
|
100
|
|
對應(yīng)的蛋白含量（mg）
|
0
|
1
|
2
|
4
|
6
|
8
|
10
|
2. 振蕩混勻后，室溫放置5-10分鐘。
3. 用酶標(biāo)儀測定A595，以不含BSA的光吸收值為空白對照。
4. 以蛋白含量（mg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
5. 樣品測定：將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當(dāng)濃度，取10ml樣品，加入100ml 2x Bradford染色液和90ml的去離子水，混勻后放置5-10分鐘，然后以0號孔為對照，測定樣品吸收值A(chǔ)595。
6. 根據(jù)測得的吸收值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得樣品的蛋白含量。
7. 計(jì)算蛋白濃度：以查得的蛋白含量除以樣品體積10ml，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得到待測樣品的實(shí)際濃度。
B． 比色皿測定
按照比色皿規(guī)格，與以上方法相同，適當(dāng)按比例增加各溶液體積即可。
注意事項(xiàng)：
1. Bradford法對于去污劑敏感的，受高濃度去垢劑影響。需確保SDS低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20,60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用BCA蛋白濃度測定試劑盒。
2. 染色液使用前請混勻。
3. 將G250染色液放置到室溫再使用，有利于提高檢測的靈敏度。
4. 由于Bradford 法在蛋白濃度增高到一定時(shí)候，顏色反應(yīng)并不成比例增加，因此得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線只是在一定范圍內(nèi)可以近似看成直線，每次應(yīng)按照實(shí)際測得的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相對**的蛋白濃度。
5. 反應(yīng)在5分鐘后顯色充分，但在10分鐘后可能開始出現(xiàn)沉淀，故建議在加入染色液后5-10分鐘內(nèi)完成檢測，誤差較小。
6. *好使用塑料比色皿，如使用玻璃比色皿或石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇清洗。
儲存條件：
染色液2-8℃保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)-20°C保存。