RIPA裂解液
產(chǎn)品簡介：
RIPA裂解液對動物細(xì)胞胞膜、胞漿、胞核成分均有較強(qiáng)裂解作用，是經(jīng)典常用的細(xì)胞組織快速裂解液。使用RIPA 裂解液制備用于**共沉淀的裂解產(chǎn)物已經(jīng)是一種優(yōu)選的標(biāo)準(zhǔn)操作。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、IP等。
產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品組成
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310011
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310012
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RIPA 裂解液
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50 ml
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100 ml
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蛋白酶抑制劑混合物
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100ul
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200ul
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使用方法：
A． 細(xì)胞裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的RIPA裂解液中加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取5-10×106個細(xì)胞，在4℃，1000rpm條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個細(xì)胞中加入500ul冷的裂解液（每106個細(xì)胞加100ul RIPA裂解液。大約相當(dāng)于6孔板的每孔加入100ul~150ul，或一個75 cm2培養(yǎng)瓶加1~2 ml。裂解液和細(xì)胞應(yīng)充分接觸。如果RIPA裂解液不足量，細(xì)胞裂解效率將會降低），混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，14000rpm條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，用于下游實(shí)驗(yàn)。
B． 組織裂解
1. 裂解液制備：每1ml冷的RIPA裂解液加入2ul蛋白酶抑制劑混合物，混勻后置冰上備用。
2. 取100mg組織樣本剪碎，加入1ml裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃，10000rpm條件下離心5分鐘。
4. 將上清吸入另一預(yù)冷的干凈離心管，用于下游實(shí)驗(yàn)。
上述蛋白提取物可分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>
注意事項(xiàng)：
1. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
2. 整個過程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
儲存條件：
-20℃保存。