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技術(shù)文章

抗體純化試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
抗體純化試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

抗體小量純化試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)ZKCY-18110
Protein A 對(duì)不同來(lái)源IgG 結(jié)合劑量
高親和性（如兔） 低親和性（如小鼠）
Protein A Sepharose 4 FF結(jié)合劑量35 mg/ml 3-10 mg/ml
Protein A Sepharose 4 FF每次用量40微升40微升（50%懸液）
每次純化抗體數(shù)量700 微克60-200微克
【操作步驟】
1. 將抗血清低溫15000g離心5分鐘,*上層有漂浮物,*下層有沉淀,取中間層。
優(yōu)化步驟:將離心后抗血清用0.22 μm針頭濾器過(guò)濾,可去除漂浮的脂肪和沉淀顆粒。
2. 振蕩懸勻Protein A Sepharose 4 FF。
3. 加40μl （50%）Protein A Sepharose 4 FF懸液到小離心柱。應(yīng)去掉Tip的**。
4. 加600 μl Buffer A.到小離心柱，500g離心1分鐘。
5. 用Buffer A.1:1稀釋樣品。將稀釋的樣品加入小離心柱，加蓋，翻轉(zhuǎn)混勻Protein
A Sepharose與樣品，重復(fù)翻轉(zhuǎn)5分鐘，以使Protein A Sepharose與樣品充分結(jié)合，
100-150g離心1分鐘。
注： 為避免液體從離心柱底部流出, 混勻時(shí)加蓋并以蓋為下方.
6. 加600 μl Buffer A 到小離心柱，500g離心1分鐘。再加600 μl Buffer A 到小
離心柱，500g離心2分鐘。
7. 洗脫選擇：
對(duì)于mouse IgG1, rat IgG1, rat IgG2a, rat IgG2b and bovine IgG1(或者不
確定的抗體亞型，使用下面(1)-(2)步洗脫.
對(duì)于mouse IgG2a, mouse IgG2b, mouse IgG3, rat IgG2c, humanIgG1-IgG4,
rabbit IgG, guinea pig IgG1, guinea pig IgG2, bovine IgG2 and anyother IgGs,
使用下面(2)步洗脫.
(1) 加0.1 mL Buffer B1 入柱子，并且柱子下面的接收管內(nèi)加入5 uL
Buffer C . 500g離心5分鐘.
(2) 加0.1 mL Buffer B2 入柱子，并且柱子下面的接收管內(nèi)加入13 uL
Buffer C . 500g離心5分鐘.
8. 柱子的更新，可安英文說(shuō)明處理[完]
小鼠兔抗血清羊
IgG濃度10 mg/ml 5 mg/ml 20 mg/ml