BCA 蛋白定量試劑盒
產(chǎn)品簡介：
堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡(luò)合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標(biāo)準(zhǔn)曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。
BCA 法快速靈敏、穩(wěn)定可靠，對不同種類蛋白質(zhì)檢測的變異系數(shù)非常小。BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響。在組織細(xì)胞蛋白提取過程中，常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結(jié)果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。
產(chǎn)品組成：
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產(chǎn)品組成
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301001（250 assays）
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301002(1000 assays)
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蛋白標(biāo)準(zhǔn)(1mg/ml)
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0.5ml
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2ml
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50ml
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200ml
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BCA試劑B
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1ml
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4ml
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使用方法：
A． 96孔酶標(biāo)板測定：
1. BCA工作液配制。根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻。根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml
BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml
BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。例如5ml
BCA試劑A加100μlBCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室溫24小時內(nèi)穩(wěn)定。
2. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制。取一塊酶標(biāo)板，按以下表格數(shù)據(jù)加入試劑：
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孔號
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0
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1
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2
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3
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4
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5
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6
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7
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蛋白標(biāo)準(zhǔn)（ml）
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0
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1
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2
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4
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8
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12
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16
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20
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去離子水（ml）
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20
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19
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18
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16
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12
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8
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4
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0
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BCA工作液（ml）
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200
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200
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200
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200
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200
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200
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200
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200
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對應(yīng)的蛋白含量（mg）
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0
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1
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2
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4
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8
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12
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16
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20
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3. 振蕩混勻后，37℃放置30分鐘。
4. 用酶標(biāo)儀測定A562，以不含BSA的光吸收值為空白對照。
5. 以蛋白含量（mg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
6. 樣品測定：將待測蛋白樣品用去離子水稀釋至適當(dāng)濃度，取20ml樣品，加入200ml BCA工作液，混勻后37℃放置30分鐘，然后以0號孔為對照，測定樣品吸收值A(chǔ)562。
7. 根據(jù)測得的吸收值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得樣品的蛋白含量。
8. 計算蛋白濃度：以查得的蛋白含量除以樣品體積20ml，再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得到待測樣品的實際濃度。
B． 比色皿測定
按照比色皿規(guī)格，與以上方法相同，適當(dāng)按比例增加各溶液體積即可。
儲存條件：
BCA試劑室溫保存。蛋白標(biāo)準(zhǔn)-20°C保存。
注意事項：
1. 在低溫條件或長期保存出現(xiàn)沉淀時，可攪拌或37℃溫育使溶解, 如發(fā)現(xiàn)**污染則應(yīng)丟棄。
2. 因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應(yīng)的速度和溫度有關(guān)，所以除非**控制顯色反應(yīng) 的時間和溫度，否則如需**測定，每次測定都需重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。若需得到更為**的蛋白濃度結(jié)果，每個蛋白梯度和樣品均需做復(fù)孔。
3. 若測定標(biāo)準(zhǔn)曲線時發(fā)現(xiàn)隨著標(biāo)準(zhǔn)品濃度的增加吸光度或顏色 沒有明顯變化，原因可能是樣品中含有嚴(yán)重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質(zhì)。BCA蛋白濃度測定試劑盒對樣品中各種物質(zhì)詳細(xì)的兼容性，參見附件BCA蛋白濃度測定兼容性表。
4. 試劑A 與試劑B 用應(yīng)密閉保存。
5. 當(dāng)試劑A 和B 混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失。
6. 使用溫箱孵育時，應(yīng)注意防止因水份蒸發(fā)影響檢測結(jié)果。
附表：
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以下是不干擾BCA方法測定的物質(zhì)濃度：
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成分
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相容濃度
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成分
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相容濃度
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NP-40
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5.0%
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葡萄糖
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10mM
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Emulgen
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1.0%
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EDTA
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10mM
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Hepes
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100mM
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Sodium Chloride
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1.0M
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DTT
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1mM
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NaOH
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0.1M
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Guanidine?HCl
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4.0M
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Ammonium Sulfate
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1.5M
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Triton X-100
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5.0%
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乙酸鈉 pH 5.5
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200mM
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辛基糖苷
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5.0%
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SDS
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5.0%
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Urea
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3.0M
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Brij-35
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5.0%
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蔗糖
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40%
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Lubrol
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1.0%
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Glycine, pH 2.8
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100mM
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CHAPS
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5.0%
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